一、雞傳染性法氏囊病檢測試劑盒
二、通用名稱(chēng)：（實(shí)時(shí)熒光PCR法）
三、包裝規格 50T/盒
四、預期用途：
雞傳染性法氏囊病(IBD)又稱(chēng)甘波羅病，是由呼腸弧病毒引起的一種急性、高度傳染性疾病。本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理，主要用于雞傳染性法氏囊病的定性篩查檢測及療效評估有重要指導意義。
五、雞傳染性法氏囊病檢測試劑盒原理：
雞傳染性法氏囊病毒檢測試劑盒針對雞傳染性法氏囊病基因組高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含雞傳染性法氏囊病基因組模板的情況下，PCR反應得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過(guò)程中相應通道信號進(jìn)行實(shí)時(shí)監測和輸出，實(shí)現檢測結果的定性分析。
六、雞傳染性法氏囊病檢測試劑盒組成：
RT-PCR反應液、混合酶液、陽(yáng)性對照、陰性對照。
七、儲存及有效期：
避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期為12個(gè)月。
八、適用儀器：ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。
九、注意事項：
1.整個(gè)檢測過(guò)程應嚴格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準備區、樣本處理區和PCR擴增區進(jìn)行操作，各區實(shí)驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實(shí)驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區應該配有紫外線(xiàn)殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗后立即上機檢測；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗應該設置陰、陽(yáng)性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內所配陰性和陽(yáng)性對照在第一次使用前應全部轉移至標本準備區，并單獨存放。
6.為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進(jìn)行任何標記。
7.儀器擴增相關(guān)參數應按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設置；不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
七、樣品DNA的制備
用自選方法提取Cps DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PGR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
制備Cps標準曲線(xiàn)（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽(yáng)性對照。
1、標記6個(gè)離心管，分別為6,5,4,3,2和1號。
2、用帶芯槍頭分別加入45μL超純水(最好用帶芯槍頭，下同)
3、先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注：請不要將本試劑盒提供的標準品次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至0E7拷貝/μL)
4、在6號管中加入5μL10E7拷貝/uL的Cps陽(yáng)性對照（上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對照.
