布魯氏菌病是一種亞急性或慢性的疾病,可造成多種動(dòng)物發(fā)病,本質(zhì)上是一種動(dòng)物疾病,特別是家畜易發(fā)病,由布魯氏菌屬的細菌引起發(fā)病,人類(lèi)可作為宿主偶爾攜帶這類(lèi)細菌。偏好與人畜共患病潛能特征有差異的細菌,主要為:羊布魯氏菌,豬布魯氏菌,流產(chǎn)布魯氏菌和犬布魯氏菌。
布魯氏菌檢測試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理,主要用于布魯氏菌的定性篩查檢測。檢測原理如下:
以基因工程表達布魯氏菌蛋白作檢測和捕獲抗原,采用“雙抗原夾心法”膠體金免疫技術(shù)設計,標記膠體金的抗原與樣本中特異性抗體形成復合物,復合物在NC膜爬行的過(guò)程中與被包被在檢測線(xiàn)上的抗原特異性結合而被固定和富集于檢測線(xiàn),使檢測線(xiàn)顯紅色反應,以試劑檢測線(xiàn)顯色與否反應來(lái)判斷樣品是否存在布魯氏菌抗體。
布魯氏菌檢測試劑盒操作步驟:
1.從試劑盒中分別取出熒光反應液、陰性對照、陽(yáng)性對照。
2.在室溫下溶解后,充分震蕩混勻,瞬時(shí)離心。
3.取出PCR八連管,放在PCR板上。
4.在PCR八連管內分裝熒光反應液,分別向多個(gè)PCR管中加入提取好的樣品核酸,其余兩個(gè)管內分別加入陰性對照和陽(yáng)性對照。完成后蓋上管蓋,并在右上角做好標記。
5.將標記好的PCR八連管放入儀器震蕩混勻后瞬時(shí)離心,取出后拿起觀(guān)察有無(wú)氣泡。
6.打開(kāi)熒光定量PCR儀器,將PCR八連管放入卡槽中,蓋上儀器。
7.點(diǎn)擊實(shí)驗程序,選擇新建實(shí)驗,點(diǎn)擊運行程序,并按照PCR八連管標記順序依次選擇孔位信息:待測樣本、陽(yáng)性對照、陰性對照。
8.點(diǎn)擊開(kāi)始按鈕,運行實(shí)驗。
9.實(shí)驗完成后,在屏幕查看實(shí)驗結果,點(diǎn)擊詳細數據可查看實(shí)驗數據,進(jìn)行數據回顧。