免疫球蛋白試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗。 往預先包被(IgY)elisa檢測,促長(cháng)激素釋放激素捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的(IgY)elisa檢測,促長(cháng)激素釋放激素呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
免疫球蛋白試劑盒使用技巧和要求:
1.試劑的選擇:選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的,但是在檢測之前還應該提前半個(gè)小時(shí)將試劑拿到常溫下進(jìn)行解凍。
2.加樣中可能遇到的問(wèn)題:在做血清或是血漿用于檢測試劑的時(shí)候,會(huì )碰到血清血漿不好分離的情況,這個(gè)時(shí)候的解決辦法是先放在常溫中1到2小時(shí),然后在進(jìn)行離心處理。
3.洗板時(shí)容易造成誤差: 因為洗板是人工洗的,所以判斷什么時(shí)候洗干凈了也是人為判斷的,這個(gè)時(shí)候帶有主觀(guān)色彩,所以多清洗幾次,還有就是在洗的時(shí)候孔與孔之間的液體容易交叉流動(dòng)。
4.顯色問(wèn)題: 使用了過(guò)期的顯色劑或者是顯色劑用過(guò)后放置時(shí)間太長(cháng),都有可能造成顯色劑不顯色。所以在進(jìn)行顯色反應的時(shí)候,要先查看顯色劑本身的情況。
5.終止反應:在加終止劑的時(shí)候由于傾倒速度快,差生氣泡,造成假陽(yáng)性結果。所以在倒終止劑的時(shí)候要緩慢倒。
6.讀板:讀板的時(shí)候首先應該保證板的清潔干凈。