ELISA試劑盒因此含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附聯(lián)絡(luò )的,靠的是蛋白質(zhì)分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的效果于??蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線(xiàn)照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時(shí)),以增加其吸附功能。例如,在檢查抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,ELISA試劑盒而廣泛的固相載體一般不能直接與核酸聯(lián)絡(luò )。換言之,包被就是抗原或抗體聯(lián)絡(luò )到固相載體表面的進(jìn)程。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區域時(shí),抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分露出,在這種情況下,直接包被效果不佳,可以選用直接的捕獲包被法,即先將關(guān)于該抗原的特異抗體作預包被,這今后通過(guò)抗原。也可用親和素生物素體系作直接包被,即用親和素先包被載體,然后參與生物素化的DNA,這種包被方法均勻、結實(shí),已擴展應用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。
ELISA試劑盒的基本原理有三條:
(1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分彼此吸附,并堅持其免疫學(xué)活性;
(2)抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶聯(lián)接形成酶聯(lián)絡(luò )物,試劑盒而此種酶聯(lián)絡(luò )物仍能堅持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
(3)試劑盒酶聯(lián)絡(luò )物與相應抗原或抗體聯(lián)絡(luò )后,可依據參與底物的顏色反應來(lái)判定是不是有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯現試驗效果。法是免疫診斷中的一項新技術(shù),現已成功地應用于多種病原微生物所導致的盛行癥、寄生蟲(chóng)病及非盛行癥等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,試劑盒依據現已運用的效果,認為法具有活絡(luò )、特異、簡(jiǎn)略、快速、安穩及易于自動(dòng)化操作等特征。不只適用于臨床標本的檢查,而且因為一天以?xún)瓤梢詸z查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于血清盛行病學(xué)調查。