萊克多巴胺檢測試劑盒原理及樣本前處理
1. 原理
萊克多巴胺檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測尿樣、組織、飼料等樣本中的萊克多巴胺(Ractopamine,RAC),試劑盒由預包被偶聯(lián)抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時(shí),加入標準品或樣品溶液,樣本中的萊克多巴胺和酶標板上預包被偶聯(lián)抗原競爭抗萊克多巴胺抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺含量成負相關(guān),與標準曲線(xiàn)比較即可得出樣本中萊克多巴胺的殘留量。
2.樣本前處理
2.1 樣本處理前須知:
實(shí)驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗結果。
2.2 配液:
配液1:復溶液
將10×復溶液用去離子水10倍稀釋?zhuān)糜跇颖镜膹腿?,復溶液?℃環(huán)境可保存一個(gè)月。
2.3 樣本前處理步驟:
2.3.1 尿樣處理方法:
直接取20µl清亮尿樣進(jìn)行測定(渾濁尿樣需要過(guò)濾或經(jīng)4000r/min離心5min,以得到清亮尿樣),暫不使用的樣本應冷凍保存。
尿樣本稀釋倍數:1 檢測下限:0.1ppb
2.3.2 組織樣本處理方法一:
稱(chēng)取均質(zhì)后的組織樣本2±0.05g ,加入6ml復溶液,充分振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min (若組織樣本中油脂含量較高,可在振蕩后放入85℃水浴10min后再離心)。取20µl上清液進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數:4 檢測下限:0.4ppb
2.3.3 組織樣本(肌肉和肝臟)處理方法二:
1)稱(chēng)取均質(zhì)后的組織樣本2±0.05g ,加入8ml乙腈溶液,充分振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min。
2)取上清液5ml,在56℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥;
▲肌肉樣本:
加入1ml 復溶液混合振蕩30s,取20µl用于分析。
肌肉樣本稀釋倍數:1 檢測下限:0.1ppb
▲肝臟樣本:
加入2ml正己烷振蕩溶解,再加入1ml 去離子水混合振蕩30s,室溫4000r/min以上離心5min,去除上層;取50µl下層與50µl復溶液混勻;取20µl用于分析。
肝樣本稀釋倍數:2 檢測下限:0.2ppb
2.3.4 飼料樣本處理方法:
1)稱(chēng)取均質(zhì)后的飼料樣品1.0±0.05g,加入10ml甲醇,再加入5g無(wú)水硫酸鈉,振蕩2min;室溫 4000r/min以上離心10min;
2)吸出離心后的上清液1ml,于56℃氮氣吹干,用1 ml復溶