轉基因植物PAT基因PCR試劑盒

【產(chǎn)品名稱(chēng)】轉基因植物PAT基因PCR試劑盒

【包裝規格】 50T/盒

【產(chǎn)品方法】實(shí)時(shí)熒光PCR法

【預期用途】

適用于檢測，可用于臨床轉基因植物PAT基因感染的輔助診斷，但不作確診使用。

轉基因植物PAT基因PCR試劑盒【檢驗原理】

本試劑盒采用TaqMan 探針?lè )▽?shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)，設計一對轉基因植物PAT基因特異性引物，結合一條特異性探針，利用相應儀器對PCR 過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監測，實(shí)現檢測結果的定性分析，用于臨床上對可疑感染者的病原 學(xué)診斷。

【主要組成成份】

反應液、酶液、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過(guò) 5 次，有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【保存和運輸】上述標本短期內可保存于-20℃，長(cháng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸， 嚴禁反復凍融。

【使用方法】 

1 樣品處理（樣本處理區）

1.1樣本前處理 

血液、體液和棉拭子樣本取100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用核酸提qu或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提qu，請按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區） 

根據待檢測樣本總數，設所需要的PCR 反應管管數為 N（N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽(yáng)性對照；反應管 數每滿(mǎn) 10 份，多配制 1 份），每測試反應體系配制如下表：

3.加樣（樣本處理區） 

將步驟1 提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短 暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量PCR 儀反應槽內；

4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為25μL； 熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數設置：

2.結果分析判定

2.1 結果分析條件設定設置Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動(dòng)分析的結果分析，當曲線(xiàn)出現整體傾斜時(shí)，根據分析后圖像 調節 Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范圍內調節）、stop 值（一般可在 5~20 范圍內調節），以及 Threshold 的 Value 值（上下拖動(dòng)閾值線(xiàn)至高于陰性對照），重新分析結果。

2.2 結果判斷陽(yáng)性：檢測通道Ct 值≤35，且曲線(xiàn)有明顯的指數增長(cháng)曲線(xiàn)； 可疑：檢測通道 35值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35值≤38，且曲線(xiàn)有明顯的增長(cháng)曲線(xiàn)， 判定為陽(yáng)性，否則為陰性； 陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無(wú) Ct 值。

3.質(zhì)控標準

 陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無(wú) Ct 值顯示； 陽(yáng)性質(zhì)控品：擴增曲線(xiàn)有明顯指數生長(cháng)期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時(shí)滿(mǎn)足，否則實(shí)驗視為無(wú)效。

4.檢測方法的局限性 

1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2.樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染，會(huì )出現假陽(yáng)性結果；

3.陽(yáng)性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會(huì )導致假陽(yáng)性結果；

4.病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組，會(huì )導致假陰性結果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì )導致假陰性結果；

6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；
7.本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完quan混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專(zhuān)用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進(jìn)行，以免交叉污染；

7.實(shí)驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學(xué)實(shí)驗室生物安全通則》進(jìn)行處理。
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