血清是較為常用的標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽(yáng)性和假陰性結果主要是干擾性物質(zhì)所致,
ELISA試劑盒分為內源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種,其中內源性物質(zhì)又分為:類(lèi)風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
?。?)類(lèi)風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合,從而導致假陽(yáng)性。
解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②標本用聯(lián)有熱變性(63℃,10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);③檢測抗原時(shí),可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。
?。?)補體
ELISA系統中固相一抗和標記二抗過(guò)程中,抗體分子發(fā)生變構,其FC段的補體C1q分子結合位點(diǎn)被暴露出來(lái),使C1q可以將二者連接起來(lái),從而造成假陽(yáng)性。
解決的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10min或56℃,30min加熱血清使C1q滅活。
?。?)嗜異性抗體
人類(lèi)血清中含有能與嚙齒類(lèi)動(dòng)物(如鼠等)Ig(s)結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來(lái),也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig(s),但加入量不足或亞類(lèi)不同時(shí)無(wú)效。
?。?)醫源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體
人ELISA試劑盒臨床開(kāi)展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),均有可能使這些病人體內產(chǎn)生抗鼠抗體;另外,被鼠等嚙齒類(lèi)動(dòng)物咬傷的病人體內也可以產(chǎn)生抗鼠Ig(s)抗體。這些病人ELISA測定時(shí)均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。
解決的辦法是:測定抗原時(shí),在標本中加入足量的正常鼠Ig(s),從而克服由于上述原因造成的假陽(yáng)性。
?。?)嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,ELISA試劑盒有時(shí)能與靶抗原結合形成復合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現,解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。
?。?)標本中其它成分的影響血清脂質(zhì)過(guò)高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過(guò)大等,均對ELISA測定結果有干擾作用。
?。?)交叉反應物質(zhì)
類(lèi)di高辛、類(lèi)AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有交叉反應的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時(shí)對測定結果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時(shí),如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時(shí),也會(huì )出現假陽(yáng)性結果。