羊小反芻獸疫病毒抗體ELISA檢測試劑盒
使用說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名：羊小反芻獸疫病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Goat Peste des Petits Ruminants Virus （ELISA）
【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預期用途】 小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一種急性接觸性傳染病，其特征為口腔、舌粘膜糜爛、流淚、流鼻液。本病的易感動(dòng)物為山羊，也可感染綿羊、白尾鹿等，但對牛無(wú)感染性。
本試劑用于檢測羊血清中小反芻獸疫病毒抗體，可用于小反芻獸疫疫苗免疫效果評價(jià)。
【原 理】
本試劑盒系由預包被小反芻獸疫病毒重組抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測羊血清、血漿樣本中小反芻獸疫病毒抗體。實(shí)驗時(shí)在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有小反芻獸疫病毒抗體，則將與酶標板上抗原結合，經(jīng)洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長(cháng)測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有小反芻獸疫病毒抗體。
【試劑盒組成】
序號 | 名稱(chēng) | 規格（96T×1） | 規格（96T×2） |
1. | 酶標板 | 96T×1 | 96T×2 |
2. | 酶標記物 (紅蓋) | 11ml×1 | 11ml×2 |
3. | 樣品稀釋液 (黃蓋) | 50ml×1 | 50ml×1 |
4. | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1 | 40ml×1 |
5. | 底物液A (白蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
6. | 底物液B (黑蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
7. | 終止液 (黃蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
8. | 陽(yáng)性對照 (紅蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
9. | 陰性對照 (綠蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
10. | 蓋板膜 | 1張 | 2張 |
11. | 自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) |
12. | 說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 |
【儲存及有效期】 儲存于陰涼干燥處（2-8℃），有效期期12個(gè)月。
包被板開(kāi)封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長(cháng)的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動(dòng)物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長(cháng)期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋?zhuān)ㄈ?/span>5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽(yáng)性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽(yáng)性對照孔分別加入陰、陽(yáng)性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，置37℃（推薦水?。┓磻?/span>30分鐘。
5.扣去孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調零，于450nm(可用630nm作參比波長(cháng)）測定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實(shí)驗正常的情況下，陰性對照≤0.10，陽(yáng)性對照≥0.6。
【檢驗結果的解釋】
1.樣品A值≥0.38為陽(yáng)性；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性。
2.本實(shí)驗結果為陰性或可疑時(shí)表明羊只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測羊血清、血漿中小反芻獸疫病毒抗體，根據A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實(shí)驗操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實(shí)驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來(lái)水沖洗。
3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應恢復至室溫方可開(kāi)袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結晶，使用時(shí)需恢復至室溫以*溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
