雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
使用說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名：雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Infectious Bronchitis Virus (ELISA)
【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預期用途】 雞傳染性支氣管炎是由傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起雞的一種急性、高度接觸傳染性呼吸道傳染病，本病呈世界性分布，是嚴重危害養禽業(yè)的主要疫病之一。疫苗免疫是預防和控制雞傳染性支氣管炎發(fā)生的有效途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實(shí)際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力。
本試劑盒適用于：雞血清抗體的檢測，以確定被檢雞是否感染過(guò)雞傳染性支氣管炎病毒或免疫雞體內抗體水平；評估雞群感染IBV的風(fēng)險程度；了解雛雞母源抗體水平，為IBV免疫程序的制定提供參考。
【原 理】
本試劑盒系由預包被雞傳染性支氣管炎病毒重組N蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒抗體。實(shí)驗時(shí)，在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有雞傳染性支氣管炎病毒的抗體，則將與酶標板上抗原結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶結合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長(cháng)測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性支氣管炎病毒抗體。
【試劑盒組成】
序號 | 名稱(chēng) | 規格（96T×1） | 規格（96T×2） |
1. | 酶標板 | 96T×1 | 96T×2 |
2. | 酶標記物 (紅蓋) | 11ml×1 | 11ml×2 |
3. | 樣品稀釋液 (黃蓋) | 50ml×1 | 50ml×1 |
4. | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1 | 40ml×1 |
5. | 底物液A (白蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
6. | 底物液B (黑蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
7. | 終止液 (黃蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
8. | 陽(yáng)性對照 (紅蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
9. | 陰性對照 (綠蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
10. | 蓋板膜 | 1張 | 2張 |
11. | 自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) |
12. | 說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 |
【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。
包被板開(kāi)封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長(cháng)的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動(dòng)物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長(cháng)期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋?zhuān)ㄈ?μl血清加入198μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽(yáng)性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽(yáng)性對照孔分別加入陰、陽(yáng)性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調零，于450nm(可用630nm作參比波長(cháng)）測定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實(shí)驗正常的情況下，陰性對照≤0.10，陽(yáng)性對照≥0.6。
【檢驗結果的解釋】
1.C.O（臨界值）=0.13+陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.07時(shí)以0.07計算）。
2.未曾免疫雞群：樣品A值≥C.O為陽(yáng)性；樣品A值＜C.O為陰性。
3.免疫雞群：監測并記錄樣本當時(shí)的抗體水平，根據結果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動(dòng)向。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒IgG抗體，根據A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實(shí)驗操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實(shí)驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來(lái)水沖洗。
3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應恢復至室溫方可開(kāi)袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結晶，使用時(shí)需恢復至室溫以*溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
