小鼠6-磷酸果糖激酶（6-PFK1）酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作說(shuō)明
本試劑盒僅供研究使用。
本試劑盒用于測定小鼠血清及相關(guān)液體樣本中6-磷酸果糖激酶（6-PFK1）的含量。
實(shí)驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠6-磷酸果糖激酶（6-PFK1）水平。用純化
的小鼠6-磷酸果糖激酶（6-PFK1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中
依次加入6-磷酸果糖激酶（6-PFK1），再與HRP 標記的6-磷酸果糖激酶（6-PFK1）抗體結
合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶
的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的6-磷酸
果糖激酶（6-PFK1）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度（OD 值），通過(guò)標準
曲線(xiàn)計算樣品中小鼠6-磷酸果糖激酶（6-PFK1）濃度。
小鼠6-磷酸果糖激酶（6-PFK1）酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（480U/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標本要求
1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
小鼠6-磷酸果糖激酶（6-PFK1）酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
240 U/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
120 U/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
60 U/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
30 U/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
15 U/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后15 分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的
OD 值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即為樣品的實(shí)際濃度。
小鼠6-磷酸果糖激酶（6-PFK1）酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間zui好
控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，zui好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD 值
大于標準品孔孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計
算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個(gè)月
