羊ELISA試劑盒作用的基本原理:抗原或抗體能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學(xué)活性;抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結合物,仍保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據加入底物的顏色反應來(lái)判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。
羊ELISA試劑盒使用的一些技巧:
1.血清:室溫血液天然凝結10-20分鐘,離心20分鐘左右。細心搜集上清,保存過(guò)程中如呈現沉積,應再次離心。
2.血漿:應根據羊ELISA試劑盒的標本的要求挑選EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右,保存過(guò)程中如有沉積構成,應該再次離心。
3.尿液:用無(wú)菌管搜集,離心20分鐘左右。細心搜集上清,保存過(guò)程中如有沉積構成,應再次離心。
4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管搜集。離心20分鐘左右。細心搜集上清。檢測細胞內的成份時(shí),用PBS稀釋細胞懸液,細胞濃度到達100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融,以使細胞損壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右。細心搜集上清。保存過(guò)程中如有沉積構成,應再次離心。
5.安排標本:切開(kāi)標本后,稱(chēng)取分量。參加一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本消融后依然堅持2-8℃的溫度。參加一定量的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充沛。離心20分鐘左右。細心搜集上清。分裝后一份待檢測,其他冷凍備用。
6.標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡快進(jìn)行試驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應防止反復凍融.