免疫球蛋白試劑盒復蘇操作流程: 1.準備工作,開(kāi)水浴鍋,預熱試劑,超凈工作臺紫外照射30min,找到對應細胞在液氮罐中的位置。
2.紫外照射后風(fēng)機吹10min后,酒精擦拭臺面,放入試劑和離心管,取15ml離心管,加入9ml培養液。
3.在液氮罐中取出細胞,先擰松放液氮,再擰緊,將凍存管放入PE手套中,然后水浴融化后取出,1-2min。
4.將凍存管?chē)娋凭蠓湃氤瑑襞_內,擦干管壁,用1ml頭將細胞轉移到已加培養液的離心管中。
5.800-1000rpm離心5min,注意配平。
6.將離心好的細胞棄上清,加入5ml*培養基重懸,用移液管吹打8-10次,避免產(chǎn)生氣泡,將細胞懸液接種到10cm培養皿中,補加5ml培養液。
7.混勻,十字法或者8字法。將混好的細胞放入培養箱中培養。
免疫球蛋白試劑盒選擇和使用需要注意的問(wèn)題:
1.試劑的選擇:選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的,但是在檢測之前還應該提前半個(gè)小時(shí)將試劑拿到常溫下進(jìn)行解凍。
2.加樣中可能遇到的問(wèn)題:在做血清或是血漿用于檢測試劑的時(shí)候,會(huì )碰到血清血漿不好分離的情況,這個(gè)時(shí)候的解決辦法是先放在常溫中1到2小時(shí),然后在進(jìn)行離心處理。
3.終止反應:在加終止劑的時(shí)候由于傾倒速度快,差生氣泡,造成假陽(yáng)性結果。所以在倒終止劑的時(shí)候要緩慢倒。
4.顯色問(wèn)題:使用了過(guò)期的顯色劑或者是顯色劑用過(guò)后放置時(shí)間太長(cháng),都有可能造成顯色劑不顯色。所以在進(jìn)行顯色反應的時(shí)候,要先查看顯色劑本身的情況。
5.洗板時(shí)容易造成誤差:因為洗板是人工洗的,所以判斷什么時(shí)候洗干凈了也是人為判斷的,這個(gè)時(shí)候帶有主觀(guān)色彩,所以多清洗幾次,還有就是在洗的時(shí)候孔與孔之間的液體容易交叉流動(dòng)。
6.讀板:讀板的時(shí)候首先應該保證板的清潔干凈。