正確實(shí)驗(yàn)我們才可以得到有效的數(shù)據(jù)，要是操作錯(cuò)誤不僅會(huì)得到的數(shù)據(jù)不準(zhǔn)，還浪費(fèi)我們時(shí)間。下面給大家講解一下ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定標(biāo)本分解。
一、標(biāo)本溶血
由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測(cè)定結(jié)果。為克服上述干擾作用，標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。
二、標(biāo)本受細(xì)菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。
三、標(biāo)本保存不當(dāng)
在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、甚至造成假陽(yáng)性;標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(如一天以上)，有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾，ELISA測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測(cè)定，5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測(cè)定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。
四、標(biāo)本凝集不全
在沒(méi)有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開(kāi)始凝固，18~24h*凝固。臨床檢驗(yàn)工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結(jié)果;這類(lèi)情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已*，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮浴楸苊馍鲜龈蓴_作用，解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?br />
五、標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響
抗凝劑(如肝素，EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性)及快速分離血清的分離膠等均對(duì)ELISA測(cè)定有一定干擾作用。
通過(guò)以上的分析和總結(jié)，臨床檢驗(yàn)ELISA測(cè)定中出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性等錯(cuò)誤的結(jié)果，排除ELISA試劑盒因素和操作因素，再有就是從標(biāo)本因素進(jìn)行分析，并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾，從而確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
