孔雀石綠檢測試劑盒樣本前期處理以及注事事項有哪些?
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實(shí)驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗結果。
5.2 配液:
配液1:1×樣品復溶液
以100 ml為例,取10 ml 10×復溶液加入50ml去離子水和40ml甲醇,充分混勻。
配液2:1×工作洗滌液
將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 魚(yú)、蝦
1)取勻質(zhì)無(wú)骨的樣品1 g,加入50 ml離心管中,加入0.3 ml 乙腈、6 ml乙酸乙酯,充分震蕩(不少于5分鐘,確保魚(yú)肉沒(méi)有結塊);
2)室溫下4000r/min 離心10min,取上清液3 ml加入10ml玻璃試管中,再加入氧化劑50 ul,震蕩2分鐘;
3)每管加入助溶劑50 ul(不振蕩),50℃水浴環(huán)境下氮氣吹干(吹完之后管底部應該有一滴液狀物,當樣本含油脂過(guò)高時(shí),此時(shí)可見(jiàn)試管底部殘留有黃色粘稠狀液滴);
4)加入1 ml 1×樣品復溶液,溶解混勻,取50ul用于分析。
樣本稀釋倍數:2 檢測下限:0.1ppb
6 注意事項
6.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì )導致所有標準的OD值偏低。
6.2 在洗板過(guò)程中如果出現板孔干燥的情況,則會(huì )出現標準曲線(xiàn)不成線(xiàn)性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進(jìn)行下一步操作。
6.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現性,很大程度上取決于洗板的一致性。
6.4 在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線(xiàn)照射。
6.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
6.7 反應終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。