氯霉素快速檢測試劑盒操作流程
首先將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì )有結晶需恢復到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
1.實(shí)驗開(kāi)始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
2.將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個(gè)樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
3.加樣反應:加標準品或樣本50ml/孔到各自的微孔中,然后加酶標記物50ml/孔,再加入50ml/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應30分鐘。
4.洗滌:小心揭開(kāi)蓋板膜,將孔內液體甩干,用工作洗滌液250ml/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
5.顯色:每孔加入底物液A 50ml,再加底物液B 50ml,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。
6.終止:每孔加入終止液50ml,輕輕振蕩混勻,終止反應。
7.測吸光值:用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長(cháng)450/630nm)。測定應在終止反應后10分鐘內完成。
氯霉素快速檢測試劑盒注意事項
1.室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì )導致所有標準的OD值偏低。
2.在洗板過(guò)程中如果出現板孔干燥的情況,則會(huì )出現標準曲線(xiàn)不成線(xiàn)性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進(jìn)行下一步操作。
3.在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線(xiàn)照射。
4.混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現性,很大程度上取決于洗板的一致性。
5.不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6.反應終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
7.顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。